技术文章
Technical articles
每一轮的亲和选择包括原始的或富集的gⅥ—cDNA文库中噬菌粒颗粒的获取和纯化以及它们自身的淘选过程。介绍两种不同的方法来抽提特异的噬菌体。1噬菌体文库的获取和纯化在每轮淘选循环中的起始部分，（富集的）Topl0F，细胞经辅助噬菌体被双重感染以便产生和纯化gⅥ—cDNAt噬菌?？帕?，从而进行下一轮的淘选。在淘选过程中，如果没有特异的缓冲液且噬菌体对诱饵的亲和力较高（如免疫亲和筛?。?，此时经双重感染获得的噬菌体颗粒并不一定要纯化。2生物素化的诱饵的制备用不同的配体标准化淘选的一个...
蛋白酶分类作用位点已知抑制物氨基肽酶金属蛋白酶带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q组成的肽键2，2，双吡啶，1．1（）-菲咯啉菠萝蛋白酶巯基蛋白酶无特异性α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A锌金属蛋白酶带有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B锌金属蛋白酶K，R羧基端EDTA，EGTA，碱性氨基酸羧肽酶Y丝氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF组织蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为...
TCA沉淀——过滤法1．为了检测放射性标记物结合蛋白质的掺入量，每个样本吸取一定量（通常为5／／1）加入盛有100t~lBSA溶液（1mg／m1）的1．5m1锥形管中。2．每管加入lmll0％冰冷的三氯醋酸，混匀。3．冰上孵育30min。4．将玻璃纤维滤纸置于一适当的过滤器上，用少量的10％三氯醋酸真空过滤，预先湿润滤纸。5．滴加样本于滤纸的中央，而末掺入标记物则通过滤纸除去，被TCA沉淀的蛋白质则吸附在滤纸上。6．再用少量的10％三氯醋酸（数毫升）洗涤2次。7．用少量的95...
疾病诊断、细菌鉴定，关键在鉴定毒素。从材料中如能迅速检出毒素为，检出速度快，治疗预防能及时。从症状、流行病学怀疑肉毒症后，应先千方百计地在极短时期内证明检材中是否有肉毒梭菌毒素，抢时间救人。在设法证明毒素存在的同时，进行细菌分离、鉴定及产毒能力测定。（1）检验程序检验菌株是否产生肉毒毒素，或污染食品中是否有产毒素的肉毒梭菌存可按图进行检验。检样接种肝汤35℃培养3天检样接种TPCYT肉汤2℃培养5天↓↓取液体部分7000r/min离心30min↓取上清中过灭菌↓↓↓血清学试验...
本实验是以质体pBluescriptIISK（-）为材?，以?同限制酶作用，经电泳分离DNA片段后，比较各DNA片段的泳动?与分子?，藉此练习限制酶的使用、电泳分析及简?DNA限制图谱（restrictionmap）的建?。以DNA操作为主的各项实验必须维持溶液与容器?受核酸分解酵素污染，因此请同学遵守以下原则并养成习惯：a.请随时保持实验桌的清洁。b.微?移液器头及微?离心管取出后?即将盖子盖上。c.请勿用手触摸灭过菌的微?移液器头、微?离心管及各种容器的内部。d.溶液打开...
器材和试剂]●PCR试剂和设备●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接头的载体●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制用于扩增的主混合液。所显示的主混合液用于VH—Vκ接头。对于VH—Vλ接头的主混合液，n＝29。单个反应主混合液/ul（n＝25）●水37925●10×Vent缓冲液5．0125●20×dNTPs2．562．5●VentDNA聚合酶0．512．52．取24支0．5ml试管，每管分别加入...
器材和试剂]●大肠杆菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5离心机（或同类型），GS3转头（均在4℃预冷）●预冷的500m1聚丙烯离心管●2L有挡板锥形瓶●基本培养琼脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6H5O72H2O、15g琼脂加水至几。高压灭菌，冷却至锥形瓶微温；接着加入lmllmol/LMgS04、0．5ml1%维生素B：（硫胺）和10m12...
2011年度诺贝尔生理学或医学奖北京时间3日下午揭晓，来自加拿大、美国和卢森堡的三名科学家因在免疫系统方面的贡献获奖。据外电报道，来自瑞典卡罗琳医学院的消息称，2011年度诺贝尔生理学或医学奖由三人分享。其中一半奖励布鲁斯·巴特勒（BruceA.Beutler）和朱尔斯·霍夫曼（JulesA.Hoffmann）在激活先天免疫方面的发现。另外一半奖励拉尔夫·斯坦曼（RalphM.Steinman）“发现树状细胞和它在适应性免疫中的作用”。此前曾获得拉斯克奖的中国科学家屠呦呦无缘...
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