技术文章
Technical articles
疟疾（malaria）是疟原虫经按蚊叮咬传播的传染病，临床上以间歇性寒战、高热、大汗和脾大、贫血等为特征，恶性疟疾能引起凶险发作。常见检测方法为间接荧光抗体染色法检测疟原虫抗体。[检测方法][方法学原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有疟原虫抗体，即可与抗原结合成相应的抗原抗体复合物，此复合物再与荧光标记抗人IgG抗体结合，zui后通过荧光显微镜观察荧光反应。[试剂]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．荧光标记抗人IgG抗体3．阴性对照、阳性对照血清4．抗原片[检测步骤...
对于组织培养中生长的细胞，zui有效的裂解方法是用去污剂进行处理。虽然有多种去污剂可用于裂解细胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非离子型去污剂。非离子型去污剂能溶解胞质和细胞膜，破坏分子间许多微弱的结合键，并能溶解大部分经常研究的蛋白质抗原，但对于大分子多聚抗原则无效，在大多数情况下该抗原也是难以研究的。浓度介于0．1％～1％的去污剂即可满足几乎所有溶解需求。非离子型去污剂裂解液一般补充等离子浓度的盐和接近中性的pH。在某些情况下，需要较剧烈的抽提条件以...
裂解酵母菌的方法是将玻璃微珠和菌细胞一起涡旋振荡进行机械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速转动撞击酵母菌从而机械破碎裂解酵母细胞。由此可见，这是一种强有力的裂解方法，但在裂解过程中又传输大量的能量，导致样本的变性。因此，和哺乳动物细胞的研究比较，酵母菌的免疫沉淀试验并不是一个好的方法，特别是研究蛋白质的性质和结构时，该方法是不可取的。1．准备工作由于免疫沉淀有多个步骤，且包括数小时孵育，因此在实验开始前必须安排好时间，注意适当利用过夜孵育的间隙。这将有助于决定何时开始裂解细胞。...
目前，我国流行的主要是乙型脑炎和森林脑炎。而在世界各地还有不同类型的病毒性脑炎流行，其病原体为各种不同的虫媒病毒，如属于A组病毒的东方马脑炎、西方马脑炎；属于B组病毒的圣路易脑炎、波瓦生脑炎、苏格兰脑炎等。波瓦生脑炎波瓦生脑炎是由波瓦生脑炎病毒引起的，经蜱传播的中枢神经系统感染的自然疫源性疾病。潜伏期7—14d。起病急，持续高热、头痛，随之出现中枢神经症状及脑膜刺激征，部分病例出现肢体强直或偏瘫。病死率高达50％，发病以儿童多见。本病分布于加拿大、美国和北欧，多发生于夏秋季，...
病毒性出血热（viralhemorrhagicfever，VHF）是指由多种RNA病毒引起，经啮齿动物或节肢动物传播的一组临床综合征，微血管损害和渗透性增加为本组疾病的基本病变，肝、心、脑、肾等器官也可受累，发热、肌痛、出血为临床特征。不同病种间病死率差异很大。[病因学]引起病毒性出血热的是多种RNA病毒，其中肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征由汉坦病毒属病毒引起；立夫特山谷热由白蛉热病毒属病毒引起；克里米亚—刚果出血热由纳罗病毒属病毒引起；拉沙热、阿根廷出血热和玻利维亚出血热...
用于染色的培养细胞既可以是贴壁细胞，也可以是悬浮细胞。贴壁细胞通常使其生长在合适的固相支持物上；悬浮细胞可以直接固定，也可以通过甩片或使用化学黏合剂黏附在固相支持物上。（一）贴壁细胞贴壁细胞的准备比较简单，可以使其生长于适当的载玻片、盖玻片或塑料组织培养皿中。如果实验要求高分辨率或需拍照，细胞应生长于载玻片或盖玻片上；如果实验的分辨率要求不高，或者是大量样品的筛选，可使细胞生长于塑料组织培养皿中。将贴壁细胞生长在固相支持物上有其*的优点，操作步骤，如冲洗、固定、通透及染色均较...
处理悬浮细胞的一个简单办法是在固定细胞之前把细胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片机。细胞在固定之前，用特殊的离心方法将细胞甩至载玻片上。需要注意的是离心力可使细胞压瘪并扩张，使抗体更容易结合细胞内部结构，但也轻微扭曲了正常的细胞结构。1．所需溶液和仪器PBS及甩片机。2．操作步骤（1）用PBS洗涤细胞（400r/min2X106／m1；离心5min），并重悬于PBS中。调整浓度至1～（2）将显微镜载玻片固定于甩片机的转头上，然后加入0．1—0．5ml细胞悬液；（3）迅速...
[器材和试剂]●包被缓冲液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特异性IgG（Pierce）：用包被缓冲液稀释为5．0ug/ml①●HRP标记的抗噬菌体抗体（AmershamBiosciences）：用封闭液以1/10000比例稀释●显色液[3，3’，5，5’—四甲基联苯胺（TMB）液体底物系统，Sigma][方法]1．将200ul兔抗人Fc—特异性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育过夜。2．用PBST洗涤多孔板。3...
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