新闻中心
News Center
[方法]1．加2～3ul纯化的连接反应物（zui大值为0.3ugDNA）到80ul的*0F’电转化感受态细胞中，轻轻摇晃混合。使用30ng（2ul）的pUCl9控制电转化效率。2．将细胞+DNA悬浮液转移到已冷却的0．2cm细胞电转化管，并冰浴3分钟。3，将GenePulserPlus电穿孔仪设置为2．5kV脉冲，电容器设为25uF，脉冲控制器设为200ns。4．用纸巾干燥电转化管，然后将它放在电转化箱中，使用一个脉冲（寄存时间常量必须为4．5～5．0毫秒）。5．立即加lml...
[方法]1．将克隆体接种到100ulLBAT96孔培养板上，并在37℃过夜振荡培养（180r/min）。2．使用96孔复制板将其接种到装有200ulLBAT的第二块96孔培养板上，在37℃培养直到生长中期（大约1，5小时）。3．在每一孔中加入10ul2×1011TU/mlR408辅助噬菌体。4．37℃无振荡培养30分钟。5．37℃过夜振荡培养。6．4℃800g离心20分钟，收集细胞。7．将上清液转移到一新的96孔培养板上，并加40pulPEG/NaCl。8．将板放置于冰上1小...
[方法]1．用200ulPBST冲洗链霉素包被的微量浓度测定板的每个孔3次。2．在2mol/LPBS中稀释生物素配体（BAS噬菌体—ELISA）或生物素捕获抗体（ISA噬菌体—ELISA），直到终浓度为10—50nmol/l，再加100ul这种溶液到农度测定板中的每个孔中。3．在室温下孵育浓度测定板1小时。4。用200ulPBST冲洗每个孔5次。5．在2mol/LPBS中稀释噬菌体溶液到浓度为1×1011TU/ml，在*次用来稀释IAS融合噬菌体的2mol/LPBS中加入诱饵...
[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制以下PCR反应混合液。配制成2个“反应管”，1个含有V。文库DNA，另1个则含有Vl文库DNA。反应管对照1对照2●scFV接头DNA（100ng/ul）1．0ul1．0ul●VH文库DNA（100ng/ul）3．5ul1．0ul●V-文库DNA（Vκ或Vλ）（100ng/ul）3．0ul1．0ul●水6．5ul5．5ul2．在每管中加入：●水，33ul●10×Vent缓冲液，5．0ul●20×dNTP，2．5ul3．在热循环仪格内加热...
[方法]1．在0．5ml微量离心管中，配制两个50/z1PCR反应混合液（1个用于VH—VκscFv文库，另1个用于Vu—VλscFv文库），其中含有：●水，36．5//1●10XTag缓冲液，5．0ul●20XdNTP，2．5ul●正向引物，2．0ul●反向引物，2．0ul●scFv基因文库（约long），1．0ul2．在热循环仪格内加热反应管到94℃，5分钟。如果没有加热盖，则滴加1滴轻质矿物油覆盖反应液。3．加入1．0ul（5单位）TdQDNA聚合酶。4．以94℃1分钟...
[方法]1，配制两个100ulPCR反应混合液来消化scFV文库，其中1个用于VH-VκscFv文库，另1个用于VH-VλscFv文库，该混合液含有：●scFVDNA（1～4ug），50ul●水，33ul●10×NEB3缓冲液，10ul●乙酰BSA（100×），1．0ul●Nco工（10U/ul），3．0f11●NoJ工（10U/ul），3．0ul2．37℃孵育反应液过夜。要用37℃孵育箱或者有加热盖的加热装置，防止水分蒸发?；蛘?，可以按PCR反应那样加一层矿物油（Sigma...
[方法]1．将电转化仪设置为200D（电阻）、25rtF（电容）和2．5kV。2．在冰上复溶电感受态细菌或使用新鲜制备的电感受态细胞。将电转化杯、杯固定夹、细胞和DNA均放于冰上。3．将80ng已纯化且无盐的DNA与50g1细菌混合。冰上孵育混合物1分钟。4．将混合物转移至0．2cm间距的电转化杯中，小心操作切勿在电极间留气泡。轻拍小杯，使所有液体均沉淀于瓶底。迅速转移以使小杯处于低温状态。5．将透明杯放入电转化仪内，确保小杯侧面干燥（以免电弧）。启动脉冲，立即加入1．0ml...
抗体文库储存料中制备噬菌体。在开始实验之前，先用滴定法（在TYE/amp/glu平板上系列稀释铺板）计算每毫升抗体文库储存料中细菌的数目。在600nm（A600）处的某个特定吸光值下，抗体文库中细菌数目较未感染细菌数目低一些。这或许是因为含有质粒的文库细菌体积更大，或者是存在死细菌。一旦滴度与A600确定关系，吸光值即可用于细菌数目的计算。对于噬菌体的制备（文库救援），来自文库储存料的起始接种量应比文库容量大5倍。接种到培养基后，细菌浓度的A600不应超过0．05。采用文库容...
当前位置：
